穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選需要經(jīng)過一系列的步驟和實(shí)驗(yàn)，下面介紹一下穩(wěn)定細(xì)胞株篩選的兩種方法步驟：

一、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染法：

先把質(zhì)粒整合到染色體上后，用相應(yīng)的質(zhì)粒DNA中的抗性標(biāo)志來篩選該細(xì)胞系，單克隆篩選穩(wěn)定細(xì)胞株；

1、篩選濃度測(cè)定，以10~14 天細(xì)胞全部死亡的抗生 素濃度為篩選濃度；

2、進(jìn)行細(xì)胞接種，轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前天接種細(xì)胞，各種細(xì)胞的平板密度依據(jù)各種細(xì)胞的生長(zhǎng)率和細(xì)胞形狀而定。進(jìn)行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞密度應(yīng)達(dá)到60%~80% 覆蓋；

3、進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染；

4、利用質(zhì)粒上含有的抗性選擇進(jìn)行篩選，并鑒定篩選結(jié)果。

二、慢病毒轉(zhuǎn)染法：
應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄病毒，慢病毒轉(zhuǎn)染，篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。慢病毒可以攜帶外源基因隨機(jī)整合進(jìn)基因組。轉(zhuǎn)染得到穩(wěn)定細(xì)胞株的效率高，是建立穩(wěn)定株的比較不錯(cuò)的方式。
1、將人源化的抗體基因轉(zhuǎn)接到慢病毒載體上，
2、使用包裝細(xì)胞，一般為293細(xì)胞，包裝出病毒，不同類型病毒包裝時(shí)間一般在3-5天。
3、用病毒轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞。包裝好的病毒要先測(cè)滴度，根據(jù)滴度決定轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞的病毒量。
4、后期篩選。轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞1-2天后加抗生 素篩選得到穩(wěn)定細(xì)胞株。